Zeng, An-PingAn-PingZeng11381282790000-0001-9768-7096Nguyen, TomTomNguyen2024-12-162024-12-162024Technische Universität Hamburg (2024)https://hdl.handle.net/11420/52447Clostridium pasteurianum is an industrial microorganism for production of 1,3-propanediol (PDO) and butanol, but suffers from lacking genetic tools for metabolic engineering and previous studies merely focused on single genomic modification. To this end, a new approach for consecutive genome engineering is presented for the first time based on an endogenous CRISPR-Cas method. Examination of the phenotype of generated mutants led to discovery of unexpected metabolites showing that genetic engineering can have significant impact on metabolism. The developed procedure expands the genetic toolkit for C. pasteurianum and provides researches an additional method which contributes to improved genetic accessibility of this strain.Clostridium pasteurianum ist ein Mikroorganismus zur industriellen Herstellung von 1,3-Propandiol (PDO) und Butanol, jedoch mangelt es an gentechnischen Methoden für das Design von Stoffwechselwegen und vorherige Studien fokussierten sich lediglich auf einzelne genomische Modifikationen. Zu diesem Zweck wird ein neuer Ansatz für das konsekutive Genom-Engineering vorgestellt, welcher erstmals auf einem endogenen CRISPR-Cas Prinzip basiert. Die Untersuchung des Phänotyps der erzeugten Mutanten führte zur Entdeckung unerwarteter Metaboliten und das entwickelte Verfahren erweitert die verfügbaren Vorgehensweisen, sodass Wissenschaftlern eine zusätzliche gentechnische Methode zur Verfügung gestellt wird.enhttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/Clostridium pasteurianum | consecutive genome engineering | CRISPR-Cas | metabolic engineering | substrate utilizationTechnology::660: Chemistry; Chemical Engineering::660.6: BiotechnologyDoctoral Thesishttps://doi.org/10.15480/882.1389710.15480/882.13897Gescher, JohannesJohannesGescherOther