M03.003 Determination of amino acids by HPLC-FLD after derivatisation

Gelöste freie Aminosäuren werden direkt aus der zentrifugierten Probe analysiert. Falls nötig können störende Proteine mit 3%iger Perchlorsäure ausgefällt werden. Sollen auch die in Proteinen und Peptiden gebundenen Aminosäuren erfasst werden oder handelt es sich um feste Proben, wird eine vorherige Hydrolyse mit HCl durchgeführt. Die Analyse erfolgt mit reversed-Phase Chromatographie nach Vorsäulenderivatisierung mit OPA (o-Phthaldialdehyd) in Gegenwart von Boratpuffer und Injektionslösung. Nach der Trennung wird die Probe mit dem Fluoreszenzdetektor (FLD) gemessen. Prolin und Hydroxyprolin reagieren nicht mit OPA und können bei Bedarf stattdessen mit FMOC (Fluorenylmethyloxycarbonylchlorid) derivatisiert werden.